应用多重PCR-单链构象多态性分析同时检测耐异烟肼和利福平的结核分枝杆菌

摘要

目的探讨应用多重 PCR-单链构象多态性分析（multiplex-polymerase chain reaction-single strand conformation polymorphism,multi-PCR-SSCP）方法快速、特异地同时快速检测结核分枝杆菌对异烟肼和利福平耐药性的效能。方法根据结核分枝杆菌的 inhA 序列、katG 序列、rpoB 序列,分别设计出3对特异性寡聚核苷酸引物,采用 multi-PCR-SSCP技术,一次性检出耐异烟肼和利福平的结核分枝杆菌。新方法的有效性通过116株临床分离株（70株耐异烟肼,66株耐利福平）的验证。结果Multi-PCR-SSCP 方法检测临床分离株基因突变的有效性,以细菌培养和药敏试验结果为金标准。116株临床分离株和 H37Rv 标准株中除了4株katG 缺失突变,其余菌株3个基因 katG、inhA 和 rpoB 在单基因 PCR 中都扩增成功。与 H37Rv 标准株相比,46株 katG 基因突变,14株 inhA 基因突变,58株 rpoB 基因突变。38株 katG 和 rpoB,4株 inhA 和 rpoB,4株 inhA 和 katG 同时突变,还有2株3个基因都有突变。multi-PCR-SSCP 对于耐异烟肼和利福平的结核分枝杆菌检出的敏感度分别为80%、82%,特异度分别为100%和92%。结论 multi-PCR-SSCP 方法敏感、特异,能同时快速有效地检测耐多药结核分枝杆菌,有望成为临床指导用药的好方法,为深入研究耐药基因检测奠定了良好的基础