流式免疫微球芯片技术分析特异性血小板自身抗体

摘要

目的建立流式免疫微球芯片技术（FCIBA）分析特异性血小板自身抗体的新方法。方法使用不同红色荧光强度的微球,包被不同血小板膜蛋白单克隆抗体（抗 GPⅡb/Ⅲa、抗 GP Ⅰa/Ⅱa、抗 GPⅣ、抗 GPⅠb/Ⅸ和抗 HLA-ABC 单克隆抗体）,制备特异性血小板自身抗体检测微球,用流式细胞仪检测微球捕获的血小板抗原-自身抗体复合物,检测结果与微孔板改进抗原捕获 ELISA（MACE）进行比较,并检测了部分免疫性以及非免疫性血小板减少性紫癜患者血清中的5种特异性血小板自身抗体。结果 FCIBA 分析抗 GPⅡb/Ⅲa、抗 GP Ⅰa/Ⅱa、抗 GPⅣ、抗 GP Ⅰb/Ⅸ和抗 HLA-ABC 5种特异性血小板自身抗体,批内重复性变异系数（CV）分别为4.82%、6.09%、5.04%、5.73%、5.30%;稀释试验呈对数线性相关,相关系数（r）分别为0.997 2、0.996 6、0.998 8、0.996 5、0.998 2;新方法对5种特异性血小板自身抗体的分析结果均与 MACE 试验结果高度相关,r 值分别为0.928 9、0.922 4、0.889 4、0.910 0、0.913 4（P 均＜0.01）。新方法分析98例免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本,血小板特异性自身抗体检出的阳性率为51.69%;其中,抗 GPⅡb/Ⅲa为40.82%,抗 GPⅠa/Ⅱa为24.45%,抗 GPⅣ为19.39%,抗 GP Ⅰb/Ⅸ为32.65%,抗 HLA-ABC 为17.35%。新方法分析40例非免疫性血小板减少性紫癜患者的血清样本,阳性率为0。结论本研究建立了 FCIBA 分析特异性血小板自身抗体的新方法,可同时分析抗血小板 GPⅡb/Ⅲa、GPⅠa/Ⅱa、GPⅣ、GPⅠb/Ⅸ和 HLA-ABC5种特异性血小板自身抗体。