高糖对大鼠肾小球足细胞表达蛋白激酶MST1的影响

摘要

目的探讨高糖对原代肾小球足细胞表达MST1的影响。方法采用健康SD大鼠取肾组织,经过梯度离心后获取细胞悬液,培养原代肾小球足细胞,分别采用流式细胞术、免疫荧光染色验证原代细胞性质;将原代足细胞分为正常培养组(5 mmol/L)及高糖培养组(25 mmol/L)分别培养,以培养后12、24、48、72 h为观察时间点。采用间接免疫荧光染色及Western印迹检测caspase-3及MST1的表达。多组比较采用单因素方差分析,组间比较采用q检验。结果 (1)采用健康SD大鼠培养可以获得稳定的原代细胞,间接免疫荧光染色显示细胞稳定表达Nephrin、Wilms肿瘤基因1(WT1),流式细胞计数检测显示93.18%的原代细胞稳定表达Nephrin蛋白。(2)免疫荧光染色显示正常培养组足细胞可见少量MST1表达,主要位于细胞浆;高糖培养组,MST1表达有所增强,48 h时开始出现较多细胞核表达。(3)Western印迹检测结果显示,正常培养组足细胞可见低浓度的Caspase-3及MST1表达,高糖培养组Caspase-3及MST1表达上调,差异有统计学意义(F=84.989、312.407,P<0.001);高糖培养组48 h时MST1可见亚带表达(MST1裂解片段),随造模时间延长表达增加。结论 MST1信号通路异常可能参与糖尿病肾病的发生。