ATP柠檬酸裂解酶鼠源单克隆抗体的制备和鉴定

摘要

目的:制备ATP柠檬酸裂解酶(ACLY)鼠源单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb),并进行相关的特异性鉴定。方法:该研究采用原核表达的重组蛋白ACLY为抗原免疫6~8周龄Balb/c雌性小鼠,利用杂交瘤融合细胞技术构建稳定分泌ACLY McAb的杂交瘤细胞,用酶联免疫吸附测定(ELISA)、免疫荧光(IF)、Western-blot、免疫组织化学(IHC)、流式细胞术(FCM)等鉴定其生物活性,检测所得抗体的特异性。结果:复筛后获得了一株能稳定分泌ACLY McAb的杂交瘤细胞(5F8D11),Ig亚类为IgG1,轻链为κ链;Western-blot、IHC、IF分析和ELISA检测证实该株ACLY McAb与ACLY具有较高的特异性。结论:该株抗ACLY特异性的McAb的成功制备,为检测ACLY蛋白表达水平及研究ACLY在肿瘤及心血管疾病中的致病机制提供有力的工具,将有助于对肿瘤及心血管疾病患者制定多样合理的治疗方案。