低密度cDNA Macroarray对干扰素α抗病毒蛋白的筛选

摘要

目的基于低密度cDNA Macroarray技术筛选出差异表达的干扰素（IFN）α抗病毒基因,以探讨IFNα抗病毒蛋白的表达与HBV复制的关系。方法以一定浓度的IFNα处理肝胚瘤细胞株HepG2和HepG2.2.15细胞6h,用cDNA Macroarray分析比较两细胞株IFNα抗病毒基因表达谱,并筛选出差异表达的IFNα抗病毒基因。将表达HBV核心蛋白（HBc）的质粒pHBc-EGFP转染HepG2细胞,RT-PCR法分析HBc对IFNα抗病毒基因表达的影响。将表达抗黏病毒A蛋白（MxA）的表达质粒pcDNA3.1-Flag-MxA转染HepG2.2.15,以酶联免疫吸附试验、Dot blot、Southern blot等方法分别检测HepG2.2.15细胞表达释放的HBsAg与HBeAg、细胞外HBV DNA和细胞内HBV DNA复制中间体（松弛环状DNA、双股线性DNA）,以判断HBV复制情况。两组间数据比较采用t检验,组间不同时间点数据比较采用单因素方差分析。结果 cDNA Macroarray分析显示HepG2和HepG2.2.15细胞的抗病毒基因表达谱具有差异性:IFNα抗病毒基因中干扰素诱导跨膜蛋白（IFITM）1、IFITM2、IFITM3、RING4等在HepG2.2.15细胞的表达被部分抑制,而重要的抗病毒蛋白MxA表达被完全抑制。HBc转染组细胞中MxA mRNA表达的相对水平为0.31±0.05,低于空白对照组的0.74±0.04,差异有统计学意义,P＜0.05。MxA蛋白转染HepG2.2.15细胞48、72h后,MxA转染组细胞上清液中HBsAg的S/CO值分别为1.42±0.21和1.58±0.18,HBeAg的S/CO值为1.44±0.14和2.28±0.24,而空白对照组细胞上清液中HBsAg的S/CO值为1.92±0.19和2.79±0.25,HBeAg的S/CO值为2.31±0.46和3.37±0.29,两组细胞上清液中HBV抗原的S/CO值差异均有统计学意义,P值均＜0.05。细胞外HBV DNA、胞内HBV复制中间体DNA均无明显变化。结论 HBV及其抗原成分的复制和表达影响着IFNα抗病毒蛋白的表达;HBV通过抑制IFNα抗病毒蛋白的表达而发挥拮抗IFNα的抗病毒活性。