mdr1基因shRNA表达载体逆转白血病耐药细胞系K562/ADM多药耐药的实验研究

摘要

目的探讨 mdr1短发夹 RNA（mdr1 shRNA）对人红白血病耐阿霉素细胞系 K562/ADM的耐药逆转作用。方法编码设计合成靶位 mdr1基因 mRNA 具有19个碱基发夹结构互补的寡核苷酸模板,构建2个 shRNA 表达载体 pSilencerTM3.1-H1 neo mdr1-A和 mdr1-B,将其稳定转染 K562/ADM细胞。用 RT-PCR 法检测转染后 K562/ADM 细胞 mdr1 mRNA 表达,Western blot 检测 P-糖蛋白（P-gp）表达,流式细胞术和 MTT 法分别检测 K562/ADM 细胞凋亡和对阿霉素的敏感性,用激光共聚焦荧光显微镜观察并测定细胞内柔红霉素的积累。结果在 pSilencerTM3.1-H11 neo mdr1-A 和 mdr1-B shRNA表达载体稳定转染的 K562/ADM 细胞,mdr1 mRNA 表达分别减少到转染前的35.9%（P＜0.05）和27.5%（P＜0.01）;同时 Western blot 结果显示 P-gp 表达被明显而特异地抑制,对阿霉素的耐药性由79倍分别减低到38倍和30倍;并且,细胞内荧光强度与对照组相比显著增加（P＜0.05）,与阿霉素联合应用凋亡细胞百分率分别增加至18.1%（P＜0.05）和54.4%（P＜0.01）。结论靶向 mdr1基因shRNA 表达载体可有效逆转耐药,使耐药的肿瘤细胞恢复对化疗药物的敏感性。