蒺藜苜蓿细胞分裂素响应调节因子ARR9自激活检测及表达分析

摘要

细胞分裂素响应调节因子ARR在植物细胞分裂素信号转导过程中扮演重要角色.以豆科模式植物蒺藜苜蓿R108为材料,采用RT-PCR技术克隆蒺藜苜蓿ARR9基因,通过生物信息学分析、酵母转录自激活检测、原核表达及表达特征分析,探究蒺藜苜蓿ARR9基因功能.结果 表明:蒺藜苜蓿ARR9基因编码区全长501bp,编码167个氨基酸,分子量18.95kD,理论等电点为6.21.生物信息学分析表明,ARR9可能参与转录调控、响应细胞分裂素及红光、细胞分裂素磷酸化信号转导及昼夜节律等过程.进化分析表明,蒺藜苜蓿ARR9蛋白与鹰嘴豆ARR蛋白亲缘关系最为接近.蒺藜苜蓿ARR9无转录自激活活性.在大肠杆菌Rosetta(DE3)中成功诱导蒺藜苜蓿ARR9蛋白表达,融合蛋白大小在25kD左右,Western Blot证实ARR9蛋白表达成功.蒺藜苜蓿ARR9基因在根中表达量最高,其表达受ABA的抑制,受IAA的短期(2～12h)抑制.