LncRNA NEAT1在结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中表达及作用机制

摘要

目的分析长链非编码RNA(LncRNA)核富集转录体(NEAT)1在结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中的表达情况,并探讨其作用机制。方法体外培养肺泡Ⅱ型RLE-6TN细胞,观察不同感染复数(MOI)的结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞6、12、24 h时NEAT1的表达变化,生物信息学软件预测NEAT1下游靶基因,采用RT-qPCR检测RLE-6TN细胞中miR-146a的表达,采用RT-qPCR和Western印迹检测Toll样受体(TLRs)信号通路相关分子及炎症因子mRNA和蛋白水平,探讨不同感染时间TLRs信号通路活化及炎症因子分泌的变化情况。结果在相同MOI条件下,与0 h时相比,RLE-6TN细胞中NEAT1的表达水平随感染时间增长显著升高(P<0.05),呈时间依赖性;在相同时间条件下,与对照组相比,结核分枝杆菌感染RLE-6TN细胞使NEAT1的表达水平显著升高,呈剂量依赖性(P<0.05)。生物信息学预测miR-146a是NEAT1下游的直接靶标。以MOI=10.0的结核分枝杆菌感染后,与0 h时相比,感染6、12、24 h的RLE-6TN细胞在6 h、12 h时TLR4 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),24 h时显著降低(P<0.05);miR-146a的表达水平显著降低(P<0.05),MyD88 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),均呈时间依赖性。与0 h时相比,6 h时RLE-6TN细胞中TLR4蛋白表达显著升高(P<0.05),12 h时显著降低(P<0.05),24 h时显著升高(P<0.05);6、12、24 h的MyD88、TRAF6、p-NF-κB蛋白水平及炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α水平显著升高(P<0.05),均呈时间依赖性。结论LncRNA NEAT1在结核分枝杆菌感染肺泡Ⅱ型细胞中表达上调,NEAT1可能通过靶向miR-146a,调控TLRs信号通路活化,诱导炎症因子表达,参与结核分枝杆菌感染过程。