miR-183靶向Orai1基因影响高糖诱导的足细胞增殖和凋亡

摘要

目的 探讨miR-183对高糖(HG)诱导的足细胞增殖和凋亡的影响及作用机制.方法 HG诱导足细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,实时荧光定量-聚合酶链反应(PCR)检测miR-183和钙通道调节分子(Orai)1 mRNA表达水平,Western印迹检测Orai1、酶切含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(酶切Caspase)-3、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)和磷酸化的哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)表达水平.转染miR-183模拟物(mimics)至足细胞,上述相同方法检测上调miR-183表达对HG诱导的足细胞增殖、凋亡及酶切Caspase-3、p-Akt和p-mTOR表达的影响.双荧光素酶报告基因实验验证miR-183与Orai1调控关系.结果 HG可抑制足细胞增殖和miR-183表达(P<0.001),促进足细胞凋亡、Orai1mRNA和蛋白及酶切Caspase-3、p-AKT和p-mTOR蛋白表达(P<0.001).上调miR-183或沉默Orai1表达可促进高糖诱导的足细胞增殖(P<0.001),抑制足细胞凋亡及酶切Caspase-3、p-AKT和p-mTOR蛋白表达(P<0.001).miR-183在足细胞中负调控Orai1表达,过表达Orai1逆转了上调miR-183表达对高糖诱导的足细胞增殖、凋亡及酶切Caspase-3、p-AKT和p-mTOR蛋白表达影响.结论 上调miR-183表达可促进HG诱导的足细胞增殖,并抑制细胞凋亡,其作用机制与负调控Orai1表达及抑制AKT/mTOR信号通路有关.