胚胎脑组织成体神经干细胞的体外增殖分化及凋亡

摘要

目的观察小鼠胚胎成体神经干细胞（NSCS）体外增殖分化，探讨 G 蛋白偶联受体5（GRK5）与 NSCS 凋亡的关系。方法分离孕14～16 d 小鼠胚胎脑组织，体外培养 NSCS，采用免疫荧光法对 NSCS 及其分化的细胞进行 Nestin、β－Tublin 和 GFAP 染色鉴定。联合 RNA 干扰沉默GRK5基因，以及 PKA 激动剂 forskolin 干预 NSCS，采用 Annexin V－FITC ／PI 双染法流式细胞术检测 NSCS 细胞凋亡比例。结果体外分离培养的小鼠胚胎脑组织可形成典型的神经球并传代，细胞表达 Nestin 蛋白后可诱导分化为神经细胞和神经胶质细胞。 GRK5 siRNA 组早期凋亡细胞比例明显高于 control siRNA 对照组（P＜0．01）；尽管 GRK5 siRNA＋PKA 激活组早期凋亡细胞比例明显低于 GRK5 siRNA 组（P＜0．05），但早期凋亡细胞比例仍明显高于 PKA 激活组（P＜0．01）。结论小鼠胚胎 NSCS 可在体外适宜条件下大量增殖，具有多向分化潜能；GRK5基因高表达可有效抑制 NSCS 早期凋亡。