MicroRNA-155靶向SOCS1基因对冠心病内皮细胞炎症损伤的影响

摘要

目的探讨MicroRNA-155靶向细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)1基因对冠状动脉粥样硬化性心脏病(CHD)内皮细胞炎症损伤的作用。方法构建动脉粥样硬化(AS)大鼠模型,分离、培养、鉴定大鼠原代冠状动脉内皮细胞,使用同型半胱氨酸与细胞共孵育24 h,进行冠心病应激,将细胞分组。双荧光素酶报告基因实验验证MicroRNA-155和SOCS1的靶向关系。实时定量反转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和Western印迹检测心肌组织和各组细胞中MicroRNA-155和SOCS1表达水平。四甲基偶氮唑(MTT)法检测细胞活力。使用Hochest33258染色检验细胞凋亡率。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、IL-6、IL-10和IL-18表达。结果与正常组相比,AS组血清中三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、Ca~(2+)水平均明显提高(P<0.05);AS组心肌组织中MicroRNA-155水平显著升高,SOCS1 mRNA及蛋白水平显著下降(P<0.05);SOCS1证实为MicroRNA-155的靶基因。与空白对照组相比,MicroRNA-155mimics组SOCS1蛋白水平下降,细胞活力降低,细胞凋亡率升高,IL-1β、IL-6和IL-18表达水平上升,IL-10表达水平下降,差异均有统计学意义(P<0.05);而MicroRNA-155 inhibitor组的SOCS1 mRNA及蛋白水平上调,细胞活力增加,细胞凋亡率下降,IL-1β、IL-6和IL-18表达水平下降,IL-10表达水平上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论MicroRNA-155通过靶向抑制SOCS1基因,进而增加冠心病大鼠心肌微血管内皮细胞凋亡率及增加促炎症因子的表达,从而发挥对心肌微血管内皮细胞的促炎作用。