衰老胃黏膜上皮细胞分泌表型分析

摘要

目的探讨细胞衰老在胃黏膜衰老相关性病变中的作用。方法采用200 μmol/L H2O2诱导胃黏膜上皮细胞GES-1衰老, 观察细胞生长曲线, 通过SA-β-Gal染色、Western blot检测p53和p16INK4a蛋白表达观察细胞衰老情况;Real-time PCR检测衰老GES-1细胞衰老相关分泌表型（SASP）相关因子白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）、白介素-8（IL-8）、白介素-β（TGF-β）、干扰素-γ（IFN-γ）和血管表皮生长因子（VEGF-A）mRNA表达, 并收集细胞条件培养液, ELISA方法检测IL-1β、IL-6、IL-8、TGF-β、IFN-γ和VEGF表达。结果 200 μmol/L H2O2处理组GES-1细胞在3 d后生长增殖停滞, 第10天时细胞变大变平、SA-β-Gal染色增加（P＆0.001）、p16INK4a 和p53蛋白表达水平明显增加, 证实H2O2成功诱导GES-1细胞衰老。和对照组比, 衰老GES-1细胞中SASP相关因子IL-1β、IL-6、IL-8、TGF-β、IFN-γ的mRNA水平升高（t=2.94、3.38、3.15、3.64、2.97, P=0.015、0.000、0.000、0.000、0.000）, VEGF-A的mRNA水平明显降低（t=2.31, P=0.20和对照组）;衰老GES-1细胞条件培养液中IL-1β、IL-6、IL-8、TGF-β1和IFN-γ浓度分别是（3.12±0.21）μg/L、（4.26±0.15）μg/L、（3.37±0.14）μg/L、（5.34±0.19）μg/L、（2.90±0.47）μg/L, 高于阴性对照组（P＆0.001）, 而VEGF浓度是（0.21±0.03）μg/ml, 低于阴性对照组（P＆0.05）。结论氧化应激诱导胃黏膜上皮细胞衰老, 衰老胃黏膜上皮细胞分泌表型改变, 可能是细胞衰老促进慢性胃炎和胃癌的主要机制。