盐度对天津厚蟹Na^(+)/K^(+)-ATPase、GDH酶活性及GDH基因表达的影响

摘要

将体质量(9.91±2.01)g的经暂养的天津厚蟹(Helice tientsinensis Rathbun)暴露于6个盐度梯度:低盐组(0、2、4)、高盐组(16、32)和对照组(8),每组设三个平行,分别于0 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h和96 h时,冰浴麻醉30 min后取肌肉和鳃组织,测定鳃和肌肉组织中Na^(+)/K^(+)-ATPase和谷氨酸脱氢酶(GDH)活性的变化,并从肌肉中克隆获得了GDH基因全长(GenBank登录号:KJ649743),以研究湿地围垦导致的盐度变化对天津厚蟹渗透压相关酶及基因表达的影响。结果表明,低盐胁迫48 h内,天津厚蟹Na^(+)/K^(+)-ATPase和GDH活性随水体盐度的降低呈上升趋势,96 h后,0和2盐度组酶活性随盐度降低而显著下降(P<0.05);高盐胁迫组,24 h内天津厚蟹组织中两酶活性升高,随盐度胁迫时间延长,16盐度组天津厚蟹鳃和肌肉组织中Na^(+)/K^(+)-ATPase活性低于对照组,GDH活性高于对照组,差异显著(P<0.05);32盐度组Na^(+)/K^(+)-ATPase和GDH活性低于对照组,显著高于0、2盐度组(P<0.05)。这表明低盐胁迫对两酶活性的影响更强。RACE技术获得天津厚蟹GDH基因cDNA全长为2078 bp,包含编码546个氨基酸的1641 bp的开放阅读框(ORF),预测分子量为60.54 kDa;Realtime-PCR实验结果表明:GDH基因在肌肉组织中表达量最高,且盐度胁迫后表达量变化明显,其中低盐胁迫组GDH基因表达量极显著低于对照组,表明GDH基因可能参与天津厚蟹的渗透压调节。