正常人眼结膜成纤维细胞转化为肌成纤维细胞过程中p53的表达变化及其对微小RNA-29b表达的影响

摘要

cqvip:目的检测正常人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)活化为肌成纤维细胞(MFs)过程中微小RNA(miR)-29b和p53的表达水平,探讨p53表达变化对miR-29b表达的影响。方法收集安徽医科大学第一附属医院2016年3—7月行眼科斜视手术术眼正常Tenon囊组织,用组织块培养法培养出原代HTFs,传代至2~4代并进行实验。将细胞分为4个组:HTFs组细胞常规培养;TGF-β1活化组细胞用10 ng/ml TGF-β1处理;将成纤维细胞活化为肌成纤维细胞;siRNA转染组及阴性对照组分别采用含p53 siRNA以及阴性siRNA转染细胞后经10 ng/ml TGF-β1活化。分别采用免疫组织化学染色法和细胞划痕实验检测HTFs组和TGF-β1活化组细胞p53蛋白表达水平及细胞迁移能力。采用荧光定量PCR法检测各组细胞miR-29b和p53 mRNA相对表达量。结果原代HTFs呈长梭形,细胞间呈螺旋状排列,TGF-β1活化后细胞转化为MFs,细胞形态不规则,排列呈无序状态。TGF-β1活化组细胞中p53蛋白染色强度显著强于HTFs组,差异有统计学意义(t=-10.384,P<0.05)。TGF-β1活化组细胞的相对迁移距离明显大于HTFs组细胞,差异有统计学意义(t=9.750,P=0.000)。HTFs组、TGF-β1活化组、siRNA转染组及阴性对照组细胞中p53 mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、3.95±2.61、0.06±0.06和0.98±0.16,miR-29b相对表达量分别为1.00±0.00、0.54±0.09、5.10±2.31和1.03±0.09,总体比较差异均有统计学意义(F=6.688,P=0.006;F=13.640,P=0.000)。TGFβ1活化组细胞p53 mRNA相对表达量显著高于HTFs组和siRNA转染组,miR-29b相对表达量显著低于HTFs组和siRNA转染组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论在HTFs转变为MFs过程中,p53显著升高,miR-29b明显降低;抑制p53表达后,miR-29b表达升高。p53与miR-29b之间可能存在相互作用来调控纤维化瘢痕的形成。