抗腺病毒3型单克隆抗体的制备及临床应用研究

摘要

目的制备特异性抗腺病毒3型(ADV-3)的单克隆抗体(mAB),并用于腺病毒性角膜结膜炎的临床实验室诊断。方法用密度梯度超速离心技术纯化ADV-3免疫5只BALB/c小鼠,取脾细胞及骨髓瘤细胞按常规方法融合、筛选、克隆化及腹水注射制备mAb。采用ELISA及免疫组织化学技术进行鉴定。结果经3次克隆化获得了3株可分泌抗ADV-3mAb的杂交瘤细胞株,经多次复苏传代仍能稳定分泌抗体,分别命名为E7、B9和G11。1株(E7)Ig重链为IgG2b,2株(B9、G11)为IgG1,轻链均属于κ型。ELISA效价均>104,相对亲合力E7>B9>G11,相对亲合力常数分别为8.14×109±1.48、2.03×108±0.43和1.63×107±0.15。腹水中mAb滴度为1×105～1×106。用抗腺病毒ADV-3E7检测临床诊断为病毒性角膜结膜炎患者标本30例,阳性者20例,阳性率66.7%,PCR检出阳性者21例,阳性率70%,两种检测方法的阳性检出率差异无统计学意义(P>0.05)。结论3株杂交瘤细胞株分泌的抗体对ADV-3抗原具有高特异性和亲和力,用于腺病毒性角膜结膜炎的临床诊断具有速度快、阳性率高的优点。