谷氨酸对视网膜Mller细胞超微结构和谷氨酰胺合成酶表达的影响

摘要

目的探讨谷氨酸对大鼠视网膜Mller细胞超微结构和谷氨酰胺合成酶(GS)表达的影响。方法取5～7d清洁级Wistar乳鼠视网膜,在含质量分数10%新生牛血清的Dulbecco改良Eagle培养基中传代培养大鼠视网膜Mller细胞。第3代Mller细胞培养基中加入终浓度分别为10、20、50、100、200μmol/L的谷氨酸作用10min。正常对照组Mller细胞培养基中未加入谷氨酸。通过免疫细胞化学法检测GS的表达鉴定视网膜Mller细胞。透射电镜观察各组Mller细胞超微结构的改变。采用Westernblot法半定量检测GS的表达。结果培养的Mller细胞中,GS阳性细胞达95%以上。透射电镜下正常对照组Mller细胞超微结构正常,谷氨酸10、20、50μmol/L组Mller细胞超微结构无明显改变。100μmol/L谷氨酸组可见Mller细胞线粒体肿胀和染色质的凝集、边聚。在200μmol/L谷氨酸组可见Mller细胞空泡样变性和凋亡小体。Westernblot结果显示,10、20、50μmol/L组GS在Mller细胞中表达较正常对照组升高,差异均有统计学意义(q=29.32、q=75.54、q=48.36、q=130.20,P<0.01),50μmol/L谷氨酸组GS的表达达高峰,100μmol/L谷氨酸组表达开始下降,200μmol/L谷氨酸组的表达低于正常对照组(q=46.67,P<0.01)。结论谷氨酸浓度影响视网膜Mller细胞中GS的表达,谷氨酸浓度超过50μmol/L可引起视网膜Mller细胞超微结构的改变。