三种不同转染方法拯救病毒的比较研究

摘要

目的比较3种不同转染方法,探索最佳的拯救病毒策略。方法 3种转染方法包括:①含T7 RNA聚合酶启动子的全长肠道病毒71（EV71）感染性质粒（P-EV71）和T7 RNA聚合酶真核表达质粒（VR-1a）共转染Vero细胞;②含T7 RNA聚合酶启动子的EV71全长基因片段（PCR产物）与VR-1a共转染Vero细胞;③利用体外转录技术得到EV71病毒全长RNA,直接转染Vero细胞。分别观察3种方法转染后产生细胞病变效应（CPE）时间及病变情况,用RT-PCR扩增拯救病毒核酸,测序验证其正确性,用蛋白印迹方法检测拯救病毒抗原。结果 3种方法均可成功转染Vero细胞得到拯救病毒,三种转染方法转染效果比较:方法③优于②、②优于①。结论三种转染方法均可成功拯救EV71病毒,以病毒RNA直接转染效果最好。