多重PCR归化法平行检测HBV和HCV的研究

摘要

目的 建立一种多重PCR归化法并应用于对HBV、HCV平行检测。方法 利用PCR反应 5′端允许添加非互补序列的原理 ,运用内外两对引物 ,经过 2轮扩增 ,使目的产物均带上共有序列 ,再以共有序列为引物进行扩增 ,实现多重扩增。比较和筛选四种核酸提取方法。运用正交优化法 ,优化并确定最佳扩增条件。对 2 8份血标本进行对比试验 ,并进行质量评价。结果 归化多重PCR方法对于HBV、HCV病毒合并感染患者的诊断敏感性为 83 .3 % ,诊断特异性为 70 .0 % ,诊断指数为15 3 3 % ,诊断效率为 72 .2 % ;对HBsAg阳性患者的HBVDNA的诊断敏感性为 78.6% ,诊断特异性为80 0 % ,诊断指数为 15 8.6% ,诊断效率为 79.2 %。对抗 HCV阳性患者的HCVRNA的诊断敏感性为75 0 % ,诊断特异性为 90 .0 % ,诊断指数为 165 .0 % ,诊断效率为 83 .3 %。结论 多重PCR归化法在多基因扩增或多种病原体的同时平行检测领域具有较大应用潜力。该方法实用、准确、可靠 ,对HBVHCV的防治具有实际意义