基于淋病奈瑟菌外膜蛋白pIA-pIB融合基因重组产物酶联免疫吸附试验的建立和应用

摘要

目的克隆淋病奈瑟菌外膜蛋白pIA、pIB基因并构建pIA-pIB融合基因及其原核表达系统以及建立基于rPIA-PIB的酶联免疫吸附试验（ELISA）。方法采用连接引物PCR构建pIA- pIB融合基因,按常规分子生物学方法构建其原核表达系统。采用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和BioRad凝胶图像分析系统检测目的重组蛋白rPIA-PIB表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rPIA-PIB。以rPIA-PIB为包被抗原建立检测淋病患者血清标本中rPIA和/或rPIB特异性IgG的ELISA,以rPIA-PIB抗血清为一抗建立检测淋病患者脓液标本中rPIA和/或rPIB的ELISA,实验中以rPIA、rPIB及其抗血清相关ELISA为对照。结果pIA-pIB融合基因与原始核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%。rPIA-PIB表达量为细菌总蛋白的29.8%,其提纯物SDS-PAGE后显示单一条带。rPIA-PIB-IgG-ELISA检测119例淋病患者血清标本的阳性率（98.3%）明显高于rPIA-IgG-ELISA（30.3%）或rPIB-IgG-ELISA（66.4%）（P＜0.01）。rPIA-PIB-ELISA检测119例淋病患者脓液标本的阳性率（91.6%）也明显高于rPIA-IgG-ELISA（27.7%）或rPIB-IgG-ELISA（62.2%） （P＜0.01）。结论成功构建淋病奈瑟菌pIA-pIB融合基因及其原核表达系统;较之单一的rPIA或rPIB,rPIA-PIB作为淋病相关检测试剂盒抗原具有明显的优越性。