一个细胞融合实验体系的建立及初步应用

摘要

目的建立一个细胞融合实验体系,观察凝血酶(thrombin,Th)对Ⅰ型人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus typeⅠ,HIV-1)包膜糖蛋白(envelope glycoproteins,Env)介导的细胞融合的影响。方法采用携带HIV-1 JRFL株env基因的表达质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与携带HIV-1 tat基因的表达质粒pcTat共转染293T细胞,检测到细胞膜表面Env表达后。将pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat分别按1:2、2:3、1:1、2:1、5:1、10:1共转染293T细胞,然后再与Magic 5A细胞进行融合实验,计数融合细胞数目并确定最适宜的融合条件,建立稳定的细胞-细胞融合实验体系。在所建立融合体系基础上利用Th处理Env表达细胞,观察对融合作用的影响。结果pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1:1、2:1共转染293T细胞,可建立稳定的细胞-细胞融合实验体系。Th能够增强细胞融合,且融合细胞数随着Th浓度增高而逐渐增加。Th处理10 min与处理30 min比较,融合增强作用更加显著。结论质粒pSV-Ⅲ-JRFL-dCT与pcTat按1:1、2:1共转染293T细胞,与Magic5A细胞进行融合实验可得到稳定的细胞-细胞融合实验体系,Th对HIV-1包膜介导的细胞融合有促进作用。