错配修复基因MSH2再表达对雌激素诱导结肠癌LOVO细胞凋亡的影响

摘要

目的观察错配修复基因MSH2再表达对雌激素诱导结肠癌LOVO细胞凋亡的影响并探讨其机制。方法按转染质粒不同及是否进行雌二醇干预将结肠癌LOVO细胞分为空质粒+乙醇组、空质粒+雌二醇组、MSH2+乙醇组、MSH2+雌二醇组、雌激素受体（ER）β+乙醇组、ERβ+雌二醇组、ERβ+MSH2+乙醇组、ERβ+MSH2+雌二醇组并予相应处理。用Western印迹法检测ERβ、MSH2的转染效率和凋亡相关caspase3蛋白的表达情况。用细胞计数试剂盒8法检测各组细胞的活性。用凋亡DNA碎片提取试剂盒提取各组细胞的DNA碎片并观察DNA碎片的梯状条带。用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。多组间比较行单因素方差分析,两组间比较行t检验。结果转染后,LOVO细胞中ERβ和MSH2蛋白的表达水平均显著升高,且其表达均不受雌二醇的影响。ERβ+雌二醇组和ER8+MSH2雌二醇组caspase3蛋白的裂解活化片段表达水平高于其他组,但该二组之间则无明显差异。空质粒+乙醇组、空质粒+雌二醇组、MSH2+乙醇组、MSH2+雌二醇组、ERβ+乙醇组、ERβ+雌二醇组、ERβ+MSH2+乙醇组、ERβ+MSH2+雌二醇组的LOVO细胞活性分别为1.72±0.25、1.74±0.31、1.77±0.35、1.74±0.33、1.70±0.34、1.02±0.48、1.71±0.31、1.07±0.18,组间差异有统计学意义（F=3.791,P＜0.05）;其中ERβ+雌二醇组低于ERβ+乙醇组,ERβ+MSH2+雌二醇组低于ERβ+MSH2+乙醇组,ERβ+雌二醇组低于空质粒+雌二醇组,ERβ+MSH2+雌二醇组低于MSH2+雌二醇组,差异均有统计学意义（t=3.158、3.075、3.648、3.253,P均＜0.05）。ERβ+雌二醇组和ERβ+MSH2+雌二醇组中可见细胞凋亡后DNA碎片形成的DNA梯状条带。空质粒+乙醇组、空质粒+雌二醇组、MSH2+乙醇组、MSH2+雌二醇组、ERβ+乙醇组、ERβ+雌二醇组、ERβ+MSH2+乙醇组、ERβ+MSH2+雌二醇组的细胞凋亡率分别为7.86±0.19、7.87±0.39、8.39±1.02、g.05±1.54、7.54±0.99、19.77±2.35、7.76±1.32、19.30±1.75,组间差异有统计学意义（F=45.436,P＜0.05）;其中ERβ+乙醇组低于ERβ+雌二醇组,ERβ+MSH2+乙醇组低于ERβ+MSH2雌二醇组,空质粒+雌二醇组低于ERβ+雌二醇组,ERβ+MSH2+雌二醇组低于MSH2+雌二醇组,差异均有统计学意义（t=8.260、9.133、8.596、7.617,P均＜0.05）。结论雌激素可能通过ERβ途径促进结肠癌细胞凋亡,该凋亡过程可能与caspase蛋白有关,MSH2可能不参与该信号通路的调控。