长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1靶向miRNA-374a-3p调控高糖诱导的人肾小管上皮细胞损伤及纤维化分子机制的研究

摘要

目的 探讨长链非编码生长停滞特异性蛋白6反义RNA1（LncRNA DLX6-AS1）对高糖诱导的人肾小管上皮细胞HK-2损伤及纤维化的影响及其可能作用机制。方法 高糖诱导HK-2细胞建立细胞损伤模型，实验分为正常对照（Con）组、高糖组（HG）、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA阴性对照（si-NC）+HG组（si-NC+HG组）、LncRNA DLX6-AS1小分子干扰RNA（si-LncRNA DLX6-AS1）+HG组（si-LncRNA DLX6-AS1+HG组）、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物阴性对照mimic NC序列（miR-NC）+HG组（miR-NC+HG组）、miR-374a-3p寡核苷酸模拟物（miR-374a-3p mimics）+HG组（miR-374a-3p+HG组）、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂阴性对照（anti-miR-NC）+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组（anti-miR-NC+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组）、miR-374a-3p特异性寡核苷酸抑制剂（anti-miR-374a-3p）+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组（anti-miR-374a-3p+si-LncRNA DLX6-AS1+HG组）。qRT-PCR法检测LncRNA DLX6-AS1、miR-374a-3p表达，ELISA法检测TNF-α、IL-1β水平，双荧光素酶报告实验检测LncRNA DLX6-AS1和miR-374a-3p的靶向关系，Western blot法检测人平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（Fn）、I型胶原α1链（COL1a1）、COL3a1蛋白表达量。结果 转染si-LncRNA DLX6-AS1或miR-374a-3p mimic可降低TNF-α、IL-1β水平和α-SMA、Fn、COL1a1、COL3a1蛋白水平（P＜0.05）。LncRNA DLX6-AS1可靶向调节miR-374a-3p表达。共转染anti-miR-374a-3p与si-LncRNA DLX6-AS1可恢复转染si-LncRNA DLX6-AS1对HG诱导的HK-2细胞炎症及纤维化作用。结论 干扰LncRNA DLX6-AS1表达可通过上调miR-374a-3p表达抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞炎症反应及纤维化。