RNA干扰p53基因表达对人皮肤成纤维细胞衰老的影响

摘要

目的建立抑制p53基因表达的人皮肤成纤维细胞（HSF）,探讨抑制p53表达对HSF衰老的影响。方法脂质体转染法将针对p53的shRNA的真核表达质粒pGCsi-p53导入HSF中,经G418筛选抗性克隆,扩大培养,建立稳定转染克隆细胞系。用RT-PCR、实时荧光定量PCR和蛋白印迹法分析目的基因及其蛋白表达。通过SAβ-gal染色法检测细胞衰老,MTT法检测细胞增殖能力。结果成功建立RNA干扰抑制p53表达的HSF细胞系,转染细胞中p53基因及蛋白水平明显下调（P＜0.01）。SAβ-gal染色结果显示,转染组衰老细胞百分比（13.47%±1.01%）与对照组（18.10%±0.66%）相比降低（P＜0.05）,MTT检测结果显示,转染组细胞增殖能力较对照组加快（P＜0.05）。结论抑制p53表达能够延迟HSF的衰老,促进细胞增殖。