激活素受体样激酶1在系统性硬化病患者皮肤成纤维细胞中的表达及作用

摘要

目的探讨激活素受体样激酶1（ALK1）在系统性硬化病患者皮肤成纤维细胞中的表达及其在纤连蛋白和Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子（PAI-1）产生中的作用。方法 Western印迹和免疫荧光法观察比较ALK1在14例健康人和12例系统性硬化病患者皮肤成纤维细胞中的表达,并设计针对ALK1的特异性小干扰RNA（siRNA）,利用转染试剂将ALK1 siRNA瞬时转染至原代培养的健康人皮肤成纤维细胞中。转染后的细胞分两组,一组用无血清培养基OPTI-MEM培养,另一组在OPTI-MEM中加入转化生长因子β1（TGFβ1）。培养72h后,Western印迹检测纤连蛋白和PAI-1蛋白量的变化。结果 Western印迹和免疫荧光法结果显示,ALK1在健康人和系统性硬化病患者皮肤成纤维细胞中均有表达,且在系统性硬化病患者中的表达量明显高于健康人;免疫荧光结果显示,在成纤维细胞中ALK1位于胞膜和胞质中。转染了ALK1 siRNA的成纤维细胞其ALK1、纤连蛋白和PAI-1蛋白表达水平分别下降90%、58%和31%。TGFβ1可显著促进对照siRNA组成纤维细胞表达ALK1、纤连蛋白和PAI-1,而ALK1 siRNA则显著抑制TGFβ1诱导的ALK1、纤连蛋白和PAI-1的增加。结论 TGFβ1可通过ALK1诱导成纤维细胞纤连蛋白和PAI-1的表达,ALK1可能参与了系统性硬化病中纤维化的形成。