体外诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为黑素细胞的观察

摘要

目的探讨骨髓间充质干细胞体外诱导成为黑素细胞的可能性。方法 6周龄雄性C57BL/6小鼠股骨基质细胞行原代培养,6次传代后以氢化可的松、重组人胰岛素、转铁蛋白和成纤维细胞生长因子诱导黑素细胞。倒置光学显微镜观察细胞分化;透射电镜观察黑素小体成熟;免疫荧光染色观察黑素细胞相关表位表达;流式细胞仪检测黑素细胞的细胞周期及获得率。结果 6次传代间充质干细胞数量近10~9,免疫荧光检测CD44阳性率94.3%和CD105阳性率82.3%。培养180 d,细胞形态接近于黑素细胞,树突增多,胞质内出现黑素小体样结构,生长周期加快为3～4 d,肉眼可见棕黑色细胞沉淀。电镜观察显示Ⅳ期为主的黑素小体。免疫荧光显示酪氨酸酶相关蛋白-1,酪氨酸酶相关蛋白-2和小眼畸形相关转录因子阳性。流式细胞仪分析显示细胞基本处于G1和S期。酪氨酸酶相关蛋白-1阳性的黑素细胞获得率约为80%。结论骨髓间充质干细胞可以被大量诱导分化为黑素细胞;诱导黑素细胞的形态学、超微结构、特异性表位等皆接近于正常黑素细胞,具有一定的增殖活性,获得率较高。