小鼠腹腔及骨髓源性肥大细胞的培养与鉴定

摘要

目的探讨小鼠腹腔及骨髓源性高纯度肥大细胞体外诱导培养方法, 并鉴定其功能。方法分别从小鼠腹腔灌洗液及股骨获得腹腔及骨髓细胞, 用白细胞介素3和干细胞因子分别联合诱导培养2周及4周, 光镜下观察细胞形态, 甲苯胺蓝染色鉴定肥大细胞成熟度, 流式细胞仪检测细胞表面分子CD117和FcεRⅠα的表达情况, 不同浓度Compound48/80刺激后镜下计数肥大细胞脱颗粒率, 分光光度法测定肥大细胞β己糖胺酶释放率。结果分别诱导培养2周及4周后, 小鼠腹腔及骨髓细胞呈大小均一且具折光性的悬浮细胞。甲苯胺蓝染色示上述两种细胞胞质内含紫红色的异染颗粒。两种细胞表面CD117及FcεRⅠα单阳性率均高于95%, 双阳性率分别为97.68% ± 0.80%及96.12% ± 0.76%。100和1 000 mg/L Compound48/80刺激组与空白对照组肥大细胞相比, 脱颗粒率差异有统计学意义（均P ＆ 0.01）。100 mg/L Compound48/80组骨髓源性肥大细胞以及10 mg/L、100 mg/L Compound48/80组腹腔源性肥大细胞β己糖胺酶释放率均较空白对照组显著升高（P ＆ 0.01或0.05）。结论白细胞介素3和干细胞因子联合可诱导小鼠骨髓干细胞及腹腔细胞定向分化增殖, 从而获得高纯度成熟且具有脱颗粒功能的肥大细胞, 为后续细胞生物学研究奠定基础。