牛冠状病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

摘要

目的 建立特异灵敏的牛冠状病毒(bovine coronavirus,BCV)荧光定量PCR检测方法,并对牛源性样本进行筛查.方法 根据Genbank中登录的BCV的N基因序列设计TaqMan引物探针,建立基于TaqMan探针法的BCV PCR检测方法,对收集到的牛源样本进行BCV筛查,并对部分阳性样本的PCR产物进行测序鉴定.结果 建立了能够特异检测BCV的TaqMan探针法荧光定量PCR检测方法,其标准曲线相关系数Slope为-3.417,相关系数r2为0.999,,扩增效率Eff为96.195％.该方法检测BCV的敏感度为40 copies.使用该方法检测64份牛肛拭子样本检出率为1.5％,检测33份牛源生物制品检出率为6％,部分阳性样本的PCR产物经测序比对为BCV核酸序列,说明BCV在国内牛群中流行,牛源相关生物制品中有感染BCV的潜在风险.结论 经测序验证,建立的方法能够灵敏的检测样本中的BCV核酸,应加强牛源相关生物制品中BCV的监测,避免人感染BCV的潜在风险.