黄连解毒汤活性成分保护帕金森症脑神经细胞损伤机制的研究

摘要

目的探讨黄连解毒汤活性成分对帕金森症脑神经细胞损伤的保护作用及其机制。方法将SH-SY5Y细胞分为5组:空白对照组、模型组、巴马汀组、汉黄芩素组、京尼平苷组。空白对照组的细胞培养基中不添加任何物质,其余各组加入500μmol/L的1-甲基-4-苯基吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium ions,MPP^(+))构建帕金森病(Parkinson’s disease,PD)细胞模型。巴马汀组中添加10μmol/L的巴马汀,汉黄芩素组中添加50μmol/L的汉黄芩素,京尼平苷组中添加50μmol/L的京尼平苷。CCK-8检测细胞活力,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡情况,免疫荧光检测α-突触核蛋白(α-synuclein,α-Syn)、酪氨酸羟化酶(tyrosine hydroxylase,TH)的表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素1β(interleukin-1β,IL-1β)的水平,Real-time PCR检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA的表达水平。结果MPP~+刺激SH-SY5Y细胞后,模型组细胞活力明显下降,α-Syn荧光强度增强,TH阳性细胞显著减少。巴马汀、汉黄芩素、京尼平苷分别干预后,细胞增殖活力显著升高,α-Syn荧光强度减弱,TH阳性细胞增加。TNF-α、IFN-γ、IL-6和IL-1β的水平明显降低,Bax、Caspase-3 mRNA的表达水平降低,而Bcl-2 mRNA的表达增加。结论黄连解毒汤活性成分能抑制炎症因子的释放从而抑制炎症反应,为帕金森症脑神经细胞损伤的治疗提供理论基础。