Midkine对神经母细胞瘤TNB1细胞生长与分化的影响

摘要

目的:通过对中期因子(midkine,MK)在神经母细胞瘤TNB1细胞中的生物学作用进行研究,揭示该因子在肿瘤细胞生长和分化中相关分子机制。方法:1)利用神经母细胞瘤临床患者数据库,明确MK的表达与神经母细胞瘤患者生存率之间的关系。在体外细胞实验中,利用携带MK shRNA载体的慢病毒体外感染神经母细胞瘤TNB1细胞,分析MK的敲减对其生长与分化的影响;2)通过进一步临床数据分析,找到与MK表达的相关基因,并采用Real-time PCR验证MK对相关基因之间表达联系;3)联合使用携带MK shRNA和肾细胞癌下调蛋白1(downregulated in renal carcinoma 1,DRR1)shRNA载体的两种慢病毒感染TNB1细胞,评价MK-DRR1轴对TNB1细胞分化以及克隆形成的影响。结果:临床数据分析显示MK的表达量与神经母细胞瘤患者生存率呈负相关(P<0.01)。体外细胞实验结果表明MK的敲减能够抑制TNB1细胞生长,同时促进TNB1细胞分化;临床数据分析结果进一步证明,在神经母细胞瘤中MK与DRR1的表达量呈负相关(P<0.01);Real-time PCR结果证实下调MK表达可增强TNB1细胞中DRR1的表达(P<0.01);细胞挽救实验显示敲低DRR1的表达可以挽救由MK敲减而产生的对TNB1细胞的分化和软琼脂克隆的影响(P<0.01)。结论:MK通过调控DRR1的表达从而参与调节TNB1细胞的生长与分化。