8-氯腺苷通过磷酸化修饰提高转录因子CREB的活性

摘要

背景与目的:8-氯腺苷是国内新近研发的抗肿瘤药物,其分子作用机制尚未完全阐明。本实验研究该药对HL-60细胞转录因子cAMP应答元件结合蛋白（cAMP-response-element-bindingprotein,CREB）活性的影响及其相关机制。方法:应用MTT法检测8-氯腺苷对人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60的半数抑制浓度（IC50）,用蛋白印迹实验（Westernblotanalysis）检测药物作用不同时间CREB蛋白水平和CREB磷酸化水平,用凝胶阻滞实验（Gelshiftassay）检测药物作用不同时间CREB与DNA的结合水平。结果:（1）8-氯腺苷对HL-60细胞的IC50约为0.42μmol/L。（2）8-氯腺苷快速诱导CREB磷酸化,30min达到最高水平,6h恢复至基础水平,CREB蛋白水平在药物作用期间保持恒定。（3）8-氯腺苷不改变CREB与DNA结合能力。结论:8-氯腺苷诱导CREB转录因子活性的提高依赖于CREB磷酸化水平的提高,而与CREB蛋白水平及CREB与DNA的结合水平无关。