内毒素诱导共培养中性粒细胞——血管内皮细胞活化的体外研究

摘要

目的建立人外周血中性粒细胞与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,研究内毒素对共培养中性粒细胞-血管内皮细胞活化的作用. 方法将ECV-304细胞接种培养,待细胞接近融合,加入2×106/ml即时分离纯化的人外周血中性粒细胞,按不同的分组加入不同浓度的内毒素(lipopolysaccharide,LPS),在倒置显微镜下观察细胞形态学的改变,于4、8、12、24 h测定细胞上清中TNFα及IL-6水平的变化. 结果不同浓度的LPS刺激内皮细胞TNFα产生没有明显的变化,而1 μg/ml LPS刺激共培养中性粒细胞-ECV-304 , 在4 h其TNFα水平明显上升,10 μg/ml LPS刺激共培养中性粒细胞-ECV-304,其TNFα水平逐渐上升,8 h后比较明显(P<0.05), 12、24 h仍维持较高水平;对于单纯内毒素刺激ECV-304细胞,随着LPS浓度的增加,IL-6生成明显增加.1 μg/ml LPS刺激ECV-304 IL-6自4 h后即明显上升,8、12 h一直维持在高水平,直到24 h才明显回落.对于共培养的中性粒细胞和血管内皮细胞,单纯共培养中性粒细胞-ECV-304 IL-6无明显变化,而较低浓度100 ng/ml LPS刺激共培养中性粒细胞-ECV-304 IL-6与1 μg/ml LPS刺激ECV-304相当,24 h 仍维持在高水平.1 μg/ml及10 μg/ml刺激共培养中性粒细胞-ECV-304 IL-6,升高更迅速,一直维持高位. 结论较低浓度的LPS即可明显活化共培养的中性粒细胞和血管内皮细胞,LPS可以使得共培养的中性粒细胞和血管内皮细胞迅速而较持久地活化.