胰岛素对体外培养兔骨骼肌肌管蛋白降解的调节作用

摘要

目的观察胰岛素对体外培养兔骨骼肌肌管蛋白降解的调节作用。方法无菌分离幼兔下肢骨骼肌肌肉,采用组织块法分离、培养成肌细胞,待其融合形成肌管,采用L-[3,5-3H]-酪氨酸标记肌管内蛋白后,随机分为对照组（用含体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）、胰岛素组（用含100 nmol／L胰岛素+体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）、地塞米松组（用含100 nmol／L地塞米松+体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）和胰岛素+地塞米松组（用含100 nmoL／L胰岛素+100 nmol／L地塞米松+体积分数10％胎牛血清的DMEM培养液培养）,每组含24孔肌管。培养24 h后．应用液体闪烁计数仪测定培养液和肌管内L-[3,5-3H]-酪氨酸的含量,计算肌管内蛋白的降解率。RNA印迹法测定肌管内泛素-蛋白酶体C2亚基mRNA的表达水平,以其与内参照甘油醛-3-磷酸脱氢酶的灰度值之比表示。结果肌管内蛋白的降解比:地塞米松组为0．50±0．03,明显高于对照组（0．38±0．04,P＜0．01）;胰岛素组为0．35±0．03,明显低于对照组（P＜ 0．05）;胰岛素+地塞米松组为0．41±0．03,明显低于地塞米松组（P＜0．01）,但仍高于对照组（P＜ 0．05）。肌管内泛素-蛋白酶体C2亚基的mRNA表达水平:与对照组（泛素2．4 kb条带为0．82±0．15、1．2 kb条带为0．60±0．10,C2亚基为0．75±0．16）比较,地塞米松组（泛素2．4 kb条带为2．15±0．23、1．2 kb条带为1．50±0．14,C2亚基为1．50±0．13）明显升高（P＜0．01）;胰岛素+地塞米松组（泛素2．4 kb条带为1．25±0．17、1．2 kb条带为0．85±0．09,C2亚基为0．90±0．15）明显低于地塞米松组（P＜0．01）;胰岛素组（泛素2．4 kb条带为0．85±0．07、1．2 kb条带为0．65±0．12,C2亚基为0．76±0．09）与对照组相近（P＞0．05）。结论胰岛素对兔骨骼肌肌管内泛素-蛋白酶体途径的活性和蛋白代谢分别有较弱的促进与抑制作用,但能有效拮抗地塞米松诱导的该途径活性的增强和蛋白的高降解,其机制尚有待进一步探讨。