烧伤血清作用下心肌细胞蛋白激酶B和p38丝裂原活化蛋白激酶通路的交叉对话研究

摘要

目的了解在烧伤血清刺激下大鼠心肌细胞内是否存在磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）与p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK,以下简称p38）信号通路的交叉对话,探讨此二通路在烧伤后心肌细胞损伤中的作用。方法建立烧伤血清刺激下的大鼠心肌细胞模型。（1）检测体积分数10%的烧伤血清刺激不同时间后,心肌细胞内磷酸化p38（p-p38）和磷酸化Akt（p-Akt）的表达水平。（2）检测在不同体积分数（5%、10%、20%）的烧伤血清或体积分数10%烧伤血清+胰岛素(1×10-6、1×10-7、1×10-8mol/L)作用下,心肌细胞内p-p38和p-Akt的表达水平,并测定细胞培养上清液中肌酸激酶（CK）的含量。（3）采用p38MAPK通路抑制剂SB203580、PI3K/Akt通路抑制剂LY294002进行阻断实验,测定心肌细胞内p-p38和p-Akt的表达水平及细胞培养上清液中CK的含量。结果（1）体积分数10%烧伤血清作用1、3、6、12、24 h时,心肌细胞p-p38水平分别为4.0±0.8、3.6±0.8、5.1±1.6、2.4±0.5、3.0±0.6,较作用0 h时（加入血清后即刻）的水平（1.0）明显增高（P＜0.01）;而p-Akt表达水平分别为0.15±0.07、0.64±0.10、0.26±0.08、0.38±0.11、0.59±0.13,较作用0 h时水平（1.00）明显降低（P＜0.01）。（2）不同浓度烧伤血清或烧伤血清+胰岛素作用下,p-p38和p-Akt的表达水平呈相反变化趋势;心肌细胞CK的释放量随烧伤血清浓度升高而增高,胰岛素对此有明显的抑制作用（P＜0.05或P＜0.01）。（3）LY294002能够升高烧伤血清导致的低p-p38水平,抵消胰岛素的保护作用（P＜0.01）;SB203580能使烧伤血清所致的低p-Akt水平得以回升（P＜0.01）,抑制烧伤血清引起的CK释放。结论烧伤血清作用下的心肌细胞存在PI3K/Akt和p38信号通路的交叉对话,并可能对心肌细胞产生调控作用。