没药提取物对人成纤维细胞增殖与胶原mRNA表达影响的实验研究

摘要

目的观察没药提取物对人皮肤Fb生物学特性的影响,探讨其促进创面愈合的可能机制。方法从人正常包皮组织中分离并培养Fb,取第3～5代细胞用于实验。（1）将Fb接种至96孔板,按随机数字表法分为对照组,1×10-4、1×10-3、1×10-2、1×10-1、1、10、1×10~2g/L没药水提取物组以及L述7种浓度的没药醇提取物组对照组用含体积分数0.25%小牛血清的DMEM培养液（简称低浓度血清培养液）培养,各浓度没药水及没药醇提取物组分别用含相应终浓度2种没药提取物的低浓度血清培养液培养。培养48 h,用倒置相差显微镜观察细胞形态,噻唑蓝法测定各组Fb增殖活性（以吸光度值表示）。（2）将Fb分别接种于培养瓶和培养皿中,均按随机数字表法分为2组:1g/L没药水提取物组,用含终浓度1 g/L没药水提取物的低浓度血清培养液培养;对照组,采用低浓度血清培养液培养。培养72 h,分别采用流式细胞仪、实时荧光定量PCR法检测Fb周期与Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。对数据进行LSD-t检验。结果 （1）各组细胞均呈长梭形生长,1 g/L没药水提取物组细胞融合较对照组更显著。1×10-3、1×10-2、1×10-1、1、10 g/L没药水提取物组Fb吸光度值分别为0.378±0.032、0.402±0.007、0.390±0.038、0.453±0.036、0.390±0.037,均高于对照组的0.332±0.044,t值分别为2.24、2.93、2.69、5.73、2.71,P值均小于0.05。1×10-4、1×10~2g/L没药水提取物组吸光度值分别为0.312±0.048、0.1 54±0.009,前者与对照组比较,差异无统计学意义（t=2.84,P＞0.05）;后者显著低于对照组（t=7.17,P＜0.05）。1×10-3、1×10-1、1、10、1×10~2g/L没药醇提取物组Fb吸光度值显著低于对照组（t值为2.30～24.79,P值均小于0.05）。（2）1g/L没药水提取物组G0/G1期细胞百分比为（74.3±6.3）%,明显少于对照组的（82.2±7.9）%,t=6.77,P＜0.05;S期及G2/M期细胞百分比分别为（16.6±3.4）%、（9.1±1.6）%,明显多于对照组的（13.3±2.3）%、（4.5±0.8）%,t值分别为7.53、6.34,P值均小于0.05。1 g/L没药水提取物组Fb中Ⅰ型胶原mRNA相对表达量（0.89±0.08）与对照组（1.00±0.06）比较,差异无统计学意义（t=1.17,P＞0.05）;Ⅲ型胶原mRNA相对表达量（1.38±0.12）显著高于对照组（1.00±0.05,t=3.81,P＜0.01）。结论没药水提取物能显著促进Fb增殖,加快Fb细胞周期进程,上调Fb中Ⅲ型胶原mRNA表达,可能与其促进创面愈合的机制相关