低能量633纳米红光刺激对人表皮细胞株HaCaT增殖及活性氧水平的影响

摘要

目的观察低能量633 nm红光照射人表皮细胞株HaCaT后,细胞增殖活性及细胞内活性氧水平的变化。方法预实验选择照射距离。采用含体积分数10%FBS、100 U/mL青霉素、100μg/mL链霉素的RPMI 1640培养液常规传代培养HaCaT细胞。采用第3代细胞进行以下实验。（1）取细胞,按随机数字表法分为空白对照组和0.082、0.164、0.245、0.491、1.472、2.453、4.910、9.810 J/cm~2照射组,每组3孔。空白对照组细胞不照光,后8个照射组细胞依次照633 nm红光10、20、30、60、180、300、600、1 200 s,每8小时重复照射1次。照射组照射48 h（6次）后,9组均用细胞计数试剂盒8和酶标仪检测细胞增殖活性（以吸光度值表示）。（2）另取细胞,分组及照光方法同实验（1）,照射组照光1次后9组均加入活性氧检测试剂,常规培养60 min。分别于培养后0（即刻）、30、60、120 min,采用酶标仪检测细胞内活性氧水平（以吸光度值表示）。（3）另取细胞,按随机数字表法分为空白对照组,0.082、0.491、2.453、9.810 J/cm~2照射组及阳性对照组。空白对照组和阳性对照组细胞不照光（阳性对照组另加入活性氧阳性对照试剂）,照射组细胞按实验（1）方法照光1次。激光扫描共聚焦显微镜观察各组细胞内活性氧表达。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、t检验。结果（1）照射距离为10 cm。空白对照组以及0.082、0.164、0.245、0.491、1.472、2.453、4.910、9.810 J/cm~2照射组细胞增殖活性分别为1.000、1.116±0.031、1.146±0.016、1.162±0.041、1.179±0.016、1.207±0.016、1.247±0.040、1.097±0.059、0.951±0.118。与空白对照组比较,0.082~2.453 J/cm~2照射组细胞增殖活性明显增强（t值为-22.803-6.779,P值均小于0.05）。4.910、9.810 J/cm~2照射组细胞增殖活性与空白对照组相近（t值分别为-2.854、0.711,P值均大于0.05）。（2）培养后0、30 min,与空白对照组比较,0.164~2.453 J/cm~2照射组细胞内活性氧水平明显增高（t值为-12.453-4.684,P＜0.05或P＜0.01）,0.082、4.910、9.810 J/cm~2照射组细胞内活性氧水平无明显变化（t值为-3.925-0.672,P值均大于0.05）。培养后60 ain,与空白对照组比较,0.082~2.453 J/cm~2照射组细胞内活性氧水平明显增高（t值为-11.387-4.717,P＜0.05或P＜0.01）。培养后120 min,与空白对照组比较,0.491~2.453 J/cm~2照射组细胞内活性氧水平明显增高（t值为-10.657-6.644,P＜0.05或P＜0.01）。（3）与空白对照组比较,0.082、0.491、2.453 J/cm~2照射组和阳性对照组细胞内活性氧的表达均增强。9.810 J/cm~2照射组细胞内活性氧的表达较其他照射组明显减弱。各组细胞内活性氧均表达于线粒体中。结论低能量633 nm红光照射对人表皮细胞株HaCaT增殖具有促进作用,该促进作用与红光照射刺激细胞线粒体产生活性氧关系密切。