魔芋AaHSFB1基因及其启动子的克隆与功能分析

摘要

为了初步探究魔芋热激转录因子HSFB1基因及其启动子的功能,以白魔芋Amorphophallus albus为试材,利用同源克隆方法获得长度为1365 bp的AaHSFB1基因序列.qRT-PCR结果表明:AaHSFB1基因对热胁迫较敏感,在根中的表达量表现出先升后降的趋势,并在热处理1h时表达丰度最高;在热处理12h时,叶片中的表达量也达到最高,在整个热处理时段内球茎中的表达量变化不大;亚细胞定位结果显示AaHSFB1定位于细胞核内.再利用FPNI-PCR法通过三轮步移扩增得到1509 bp的AaHSFB1启动子序列.生物信息学分析表明:AaHSFB1含有热胁迫响应元件HSE及多种与植物发育及逆境应答相关的顺式作用元件.为进一步分析AaHSFB1启动子的功能,构建融合表达载体prAaHSFBI:GUS,利用农杆菌介导法转入拟南芥,热处理后对转基因拟南芥进行GUS组织化学染色鉴定,结果显示其表达部位主要在叶中.因此推测AaHSFB1可能在白魔芋抗外界逆境特别是热胁迫中起重要作用.