霍乱毒素B亚单位与胰岛素原融合基因的克隆、表达及重组蛋白特性分析

摘要

构建了霍乱毒素B亚单位(Choleratoxin B subunit,CTB)与胰岛素原(Proinsulin)的融合基因CTB-PROIN,将该融合基因克隆到大肠杆菌表达载体pET-30a(+)中,获得重组质粒pETCPI,并将该质粒转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)中;重组菌株经IPTG诱导后,其表达产物经过15%SDS-PAGE分析表明该菌株可以表达融合蛋白,其分子量约为21.6 kD,且主要以包涵体形式存在,约占全菌蛋白的25%.含CTB-PROIN重组蛋白的包涵体经过变性和复性后,CTB-PROIN可以在体外自组装成五聚体结构.Western blotting分析结果表明重组CTB-PROIN蛋白可分别被霍乱毒素的抗体和胰岛素的抗体识别,说明该蛋白具有霍乱毒素和胰岛素的双重抗原性.同时在体外,CTB-PROIN蛋白可与神经节苷脂GM1(monosialoganglioside)特异性结合,表明了该融合蛋白在体外具有生物活性.这些研究结果为利用原核生物表达系统研制廉价、高效的Ⅰ型糖尿病口服疫苗奠定了基础.