鹅IL-2基因在大肠杆菌中的表达及其可溶性单体的分离

摘要

将去除信号肽编码序列的鹅 IL-2 基因克隆到原核表达栽体 pET-28a (+),构建了重组表达质粒 pET-28a(+)-goIL-2,转化大肠杆菌 BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,实现了重组鹅 IL-2(rgoIL-2)蛋白在大肠杆菌中的表达.SDS-PAGE 和 Western-blotting 分析显示,表达蛋白的分子量约为 15.0 kD,能被抗鹅 IL-2 单克隆抗体特异识别.可溶性分析表明表达蛋白大部分以包涵体形式存在,部分以可溶形式存在,非变性电泳可见可溶性蛋白存在单体和多聚体组分.镍柱亲和层析法纯化的rgoIL-2 蛋白过滤后,利用 AKTA FPLC(快速蛋白分离纯化系统)进行逐级分离,非变性电泳可见单一的鹅 IL-2 可溶性蛋白单体.体外生物学活性分析显示鹅 IL-2 可溶性蛋白单体能刺激鹅淋巴细胞增殖.这为进一步研究鹅 IL-2 的生物学功能及其临床应用奠定基础.