烫伤对大鼠下丘脑视上核、室旁核、垂体和血浆内皮素-1含量的影响

摘要

@@内皮素(endothelin，ET)在下丘脑含量很高，大鼠下丘脑ET主要形式是ET-1，也含有E T-3。Yoshizawa及蒋应明等报道下丘脑神经元能自身合成和表达ET-1，主要集中在视上核 (Supraoptic nucleus，SON)和室旁核(paraventricular nucleus，PVN)部位，但其功能意 义尚不清楚。ET对下丘脑-垂体-肾上腺轴具有调节作用，可促进应激情况下AVP的释放。 烫伤是一种强烈的应激刺激，同时又可引起体内渗透压的升高，因此推测重度烫伤可能影响 下丘脑ET-1合成和分泌。本实验应用放射免疫测定法，观察大鼠烫伤后不同时间下丘脑SON 和PVN、神经垂体、腺垂体和血浆中ir-ET-1含量的动态变化，以了解烫伤对下丘脑和垂体 中ET-1含量影响和下丘脑ET-1的功能。rn1　材料和方法rn　　雄性Sprague-Dawley大鼠96只，体重280～320 g，随机均分为烫伤后即刻、15 min、60 min、180 min四组及相应的4个对照组。经20％尿酯腹腔麻醉(5 ml／kg)后，背部剃毛，实 验组用沸水烫背部7 s，造成20％体表面积的Ⅱ度烫伤，对照组动物背部浸入37℃水中假烫7 s。各组动物分别按上述烫后不同时间断头，收集躯干血于预冷的含抑肽酶(每ml血加500 k IU)和Na2 EDTA(每ml血加10 mg)的指形管中，4℃离心(3 000 r/min，10 min)，取血浆 置 于-40℃冰箱保存待测；同时迅速取全脑和垂体，置沸生理盐水中煮10 min，分离神经垂体 和腺垂体；自前连合平面至乳头体尾端取下丘脑，双侧包括下丘脑外侧部。用4％多聚甲醛 溶液固定24 h。用震动切片机行下丘脑冠状切片，片厚200μm，依据大鼠脑立体定位图谱 ，用不锈钢针管行打孔法取下丘脑SON和PVN组织，称重，将SON和PVN组织混在一起，加1 mo l/L醋酸匀浆提取，2 h后加入1 mol/L NaoH中和，低温离心取上清液行放射免疫测定。ET- 1放免测定试剂盒由北京解放军总医院放免研究所提供，最小检出量为0．5pg。