整合素连接激酶介导大鼠肾小球系膜细胞生物学行为的变化

摘要

目的探讨整合素连接激酶(ILK)对大鼠肾小球系膜细胞形态、黏附、迁移、增殖、分化、细胞外基质(ECM)组装等细胞生物学行为的影响,进一步揭示ILK在肾脏的病理、生理意义。方法体外分离、培养SD大鼠肾小球系膜细胞,应用基因转染技术,将携带小鼠ILKcDNA全长的腺病毒感染系膜细胞,同时设立空白对照组、空载体组。采用Westernblot方法检测ILK、纤维连接蛋白(FN)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白质表达水平;应用细胞生物学方法观察细胞伸展、黏附率;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖率。结果Westernblot显示ILK基因转染细胞组ILK、FN、α-SMA蛋白质表达水平均显著高于其他二组(Pa0.05);空白对照、空载体、ILK基因转染细胞组ILK蛋白质半定量值分别为0.42±0.06、0.49±0.07和2.79±0.16;FN蛋白质半定量值分别0.46±0.07、0.50±0.07和2.53±0.19;α-SMA蛋白质半定量值分别0.52±0.09、0.58±0.07和2.61±0.18。空白对照、空载体、ILK基因转染细胞组细胞伸展率分别为:(69±4)%、(63±8)%、(80±3)%(Pa<0.01);黏附率为(42±4)%、(38±4)%、(75±5)%(P<0.01)。细胞增殖率也以ILK基因转染细胞组最高,与其他二组比较有显著差异(Pa<0.01),空白对照组、空载体组、ILK基因转染细胞的MTT值分别为0.60±0.07、0.58±0.06、1.16±0.10。结论高表达ILK的肾小球系膜细胞,其表型、黏附、迁移、增殖等细胞生物学行为发生改变,细胞对ECM的重塑能力增强。因此ILK可能在肾脏疾病的进展中起重要作用。