过表达NR4A1促进山羊皮下脂肪细胞分化

摘要

旨在克隆山羊N R4A1基因的CDS区序列,明确其组织和细胞表达模式,以及探究过表达N R4A1基因对山羊皮下脂肪细胞分化的影响.本试验利用双酶切法构建山羊过表达载体pcDNA3.1-NR4A1.以1周岁简州大耳羊(n=5)为试验动物.利用RT-PCR方法和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)技术克隆NR4A1基因编码区序列并明确其时空表达特性,再将山羊pcDNA3.1-NR4A1载体转染皮下脂肪细胞使NR4A1过表达,利用形态学方法检测过表达后脂滴聚集的变化,同时采用qPCR方法检测脂肪分化标志基因相对表达水平的变化.结果获得山羊N R4A1基因的编码区序列是1797 bp,编码598个氨基酸;N R4A1在山羊各组织中广泛表达,且在山羊背最长肌中的相对表达水平最高(P<0.01),在山羊皮下脂肪细胞分化60 h表达量最高(P<0.01);过表达NR4A1基因显著促进山羊皮下脂肪细胞的脂滴积累,并且显著提高C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ、L PL、SREBP1和A P2的相对表达水平(P<0.05).NR4A1基因可能是山羊皮下脂肪细胞分化的正调控因子,且可能是协同脂肪分化标志基因的表达量来实现的.