载牛乳铁蛋白肽-壳聚糖纳米粒对过氧化氢诱导的奶牛乳腺上皮细胞氧化损伤的保护作用

摘要

本试验以载牛乳铁蛋白肽-壳聚糖纳米粒(BLfcin-NPs)为添加剂,研究其对过氧化氢(H_(2)O_(2))诱导的奶牛乳腺上皮细胞(BMECs)氧化损伤的保护作用。采用单因素完全随机试验设计,以BMECs为模型,采用不同浓度[0(对照组)、100、200、400、600、800、1000μmol/L]H_(2)O_(2)对BMECs分别处理0、2、4、6、8、12 h,确定构建BMECs氧化损伤模型的最佳H_(2)O_(2)浓度及作用时间。以500μg/mL的BLfcin-NPs预处理BMECs 12 h后用400μmol/L的H_(2)O_(2)处理6 h,检测BMECs内线粒体膜电位(MMP)、抗氧化指标以及抗氧化与凋亡相关基因mRNA相对表达量。结果显示:1)与0μmol/L H_(2)O_(2)处理的对照组相比,不同浓度H_(2)O_(2)作用6 h后显著或极显著降低BMECs活力(P<0.05),并对细胞产生毒性,并且在400μmol/L的H_(2)O_(2)作用下BMECs晚期凋亡率极显著升高(P<0.01)。400、600、800μmol/L的H_(2)O_(2)作用6 h后,BMECs内ROS含量增加,且呈剂量依赖性。2)与未进行BLfcin-NPs预处理的H_(2)O_(2)诱导的氧化损伤BMECs细胞相比,BLfcin-NPs预处理显著提高了BMECs内线粒体膜电位下降比例(P<0.05),显著升高了谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)活性(P<0.05),并显著降低了丙二醛(MDA)含量(P<0.05);此外,BLfcin-NPs预处理还显著上调了BMECs内抗氧化相关基因核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶1(NQO1)的mRNA相对表达量(P<0.05),同时显著上调了凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA相对表达量(P<0.05),并显著下调了Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)的mRNA相对表达量(P<0.05)。综上所述,BLfcin-NPs通过调控Nrf2信号通路中关键基因的表达缓解H_(2)O_(2)诱导的BMECs氧化损伤。