长链非编码RNA在脂多糖诱导人巨噬细胞炎症反应中的表达变化

摘要

目的分析长链非编码RNA（lncRNA）在脂多糖（LPS）诱导人巨噬细胞炎症反应中的表达差异。方法分离健康者外周血单个核细胞,采用贴壁法培养纯化为巨噬细胞并分为空白对照组和LPS刺激组。用1 mg/L LPS刺激巨噬细胞12 h后收集细胞及其培养上清液,采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL-1β、IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量;利用lncRNA基因芯片检测两组细胞中lncRNA表达谱的变化,筛选出差异表达lncRNA分子并进行分析。采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应（qRT-PCR）对部分差异表达lncRNA分子进行验证;并以NR028034为研究对象,检测LPS诱导巨噬细胞炎症反应中NR028034的动态表达变化。结果①与空白对照组相比,LPS诱导巨噬细胞12 h后上清液中炎性细胞因子含量均明显升高[IL-1β（ng/L）:562.93±61.17比59.74±15.68,IL-6（ngg/L）:702.46±9231比71.66±18.25,TNF-α（ng/L）:794.50±63.89比85.12±22.07,均P＜0.01],证实巨噬细胞炎症反应模型构建成功。②以LPS刺激组与空白对照组表达比值≥2倍且P＜0.05作为差异表达lncRNA。LPS刺激巨噬细胞后差异表达lncRNA有1479条,上调2倍以上的lncRNA共953条,其中上调5倍以上的lncRNA有49条;下调2倍以上的lncRNA共526条,其中下调5倍以上的lncRNA有35条。③用qRT-PCR对部分lncRNA进行验证的结果与lncRNA芯片检测结果一致。④LPS刺激巨噬细胞后3、6、12 h,NR028034表达水平较空白对照组分别上调了（4.4.1±0.65）、（11.56±2.04）、（18.58±1.36）倍（均P＜0.01）。结论 LPS诱导人巨噬细胞炎症反应后,lncRNA表达谱发生显著变化,lncRNA可能参与调控了巨噬细胞炎症反应。