NLK通过维持NF-κB/P53平衡抑制前列腺炎-癌转化

摘要

背景与目的:前列腺炎症是促进其癌变的一个重要因素,但关键的分子机制不明。Nemo样激酶(Nemo-like kinase,NLK)在前列腺癌组织中的表达水平较良性组织显著降低,并且在前列腺癌细胞中沉默NLK表达可增强核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的转录活性。本研究旨在探讨NLK调控前列腺炎-癌转化的作用及其机制,为应用抗炎新策略预防前列腺癌提供新的分子靶点和理论依据。方法:采用人前列腺上皮细胞RWPE-1与人急性单核细胞白血病细胞THP-1共培养的方法建立前列腺炎-癌转化细胞模型(RWPE-1/THP-1)。采用MTT实验及软琼脂集落形成实验检测NLK基因沉默或过表达对模型细胞增殖及恶性转化能力的影响。采用双荧光素酶报告基因实验检测NLK基因沉默或过表达对模型细胞NF-κB转录活性的影响。采用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction,RTFQ-PCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测NLK基因沉默或过表达对模型细胞中核受体相关因子1(nuclear receptor-related factor 1,Nurr1)和鼠双微体基因2(murine double minute 2,MDM2)的mRNA表达和蛋白水平的影响。采用Western blot检测NLK基因沉默或过表达对模型细胞P53蛋白表达水平的影响。采用免疫荧光和免疫共沉淀技术分别检测Nurr1蛋白和P53蛋白在RWPE-1细胞中的定位分布及相互作用情况。结果:与RWPE-1/THP-1组相比,RWPE-1(NLK↑)/THP-1组的细胞增殖及转化能力显著降低,NF-κB转录活性显著减弱,Nurr1和MDM2的mRNA表达和蛋白水平显著下调,P53蛋白表达水平显著上升(P<0.05);与之相反,RWPE-1(NLK↓)/THP-1组的细胞增殖及转化能力显著升高,NF-κB转录活性显著增强,Nurr1和MDM2的mRNA表达和蛋白水平显著上调,P53蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。此外,Nurr1蛋白与P53蛋白在RWPE-1细胞的细胞核中存在共定位及相互作用。结论:NLK抑制前列腺炎-癌转化可能依赖于其对NF-κB/P53平衡的维护。