新的锌指蛋白Mip1的DNA结合序列的筛选

摘要

目的 筛选一个新的锌指蛋白Mip1的DNA结合位点.方法 将Mip1 cDNA全长克隆入原核表达质粒pGEX-4T-1构建了Mip1的原核表达质粒pGEX-Mip1.用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-Mip1融合蛋白.通过固定化的GST-Mip1,从寡核苷酸文库中俘获Mip1的结合的寡核苷酸片段;将所得寡核苷酸片段插入T-载体,通过测序、序列比对得到DNA结合位点.结果 锌指蛋白Mip1的融合蛋白能在大肠杆菌中高效表达,能与固定化还原性谷胱甘肽很好地亲和而得到纯化;用固定化的Mip1融合蛋白俘获到了其结合的寡核苷酸序列,通过测序、序列比对,得到了Mip1的DNA结合位点.结论 Mip1的DNA结合位点的核心序列为G/TCCTA,Mip1的DNA结合位点的成功确定为Mip1功能的深入研究打下了基础.