柱状田头菇遗传转化体系启动子的筛选

摘要

柱状田头菇(茶树菇)Cyclocybe aegerita是一种美味的食用菌,具有很高的经济价值.构建高效表达的遗传转化体系,可以深入揭示其遗传特征及基因功能.以柱状田头菇YSG为实验材料,使用多片段重组克隆构建载体,PEG介导的原生质体转化,并以qRT-PCR为测定方法,对actin、gpd和Pumgpd不同长度5个启动子片段驱动靶标基因的表达量进行分析.依据actin基因启动子构建的载体pAa-actin-1和pAa-actin-2获得转化子中,靶标基因表达量为对照3倍以上转化子数量分别为50％和33.33％,最高表达量分别为对照的10.45和6.23倍;携带pAa-gpd-1、pAa-gpd-2和pAa-Pumgpd启动子的载体获得的转化子中,表达量为对照3倍以上的数量分别为0、28.57％和25％,最高表达量分别为对照的2.93、7.75和4.31倍.actin启动子获得高表达转化子得率较gpd和Pumgpd启动子片段高,适用于柱状田头菇转化体系构建.