BMP9通过Orai1途径促进小鼠骨髓间充质干细胞骨向分化

摘要

目的 探索钙释放激活钙通道蛋白1(Orai1)在骨形态发生蛋白9(BMP9)诱导骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的作用.方法 贴壁法分离BMSCs,取第3代BMSCs加入10-5 mol/L BMP9在不同时间点观察Orai1 mRNA表达;Orai1基因敲减后利用RT-qPCR和Western blot检测转染效果;利用茜素红染色、碱性磷酸酶(ALP)染色观察BMP9诱导BMSCs骨向分化效果,RT-qPCR检测骨性标志物RUNX2、骨桥蛋白(OPN)、骨钙素(OCN)基因表达.将细胞复合在骨组织工程支架材料羟基磷灰石/聚乳酸/壳聚糖(hydroxyapatite/PLA/chitosan)植入裸鼠皮下,4周后通过HE染色和Masson染色观察体内成骨效果.结果 BMP9诱导第5天开始Orai1 mRNA表达逐渐升高(P<0.05);基因敲减后Orai1基因和蛋白表达显著降低(P<0.05);Orai1基因敲减后成骨效果显著下降(P<0.05),并且骨性标志物RUNX2、OPN和OCN基因表达显著下降(P<0.05);过表达BMP9能显著提高体内BMSCs异位成骨能力,Orai1敲减后显著抑制了这一效果(P<0.05).结论 BMP9促进BMSCs骨向分化,可能是通过调控Orai1发挥效应.