抗血小板GPⅢa单克隆抗体SZ-21单链抗体片断的表达和特性

摘要

将能与血小板膜糖蛋白IIIa特异结合的单克隆抗体SZ-21构建成单链抗体.应用RT-PCR技术,从分泌SZ-21单克隆抗体的杂交瘤细胞中克隆出VH和VL可变区基因,并构建成SZ-21单链抗体(SZ-21ScFv).将该单链抗体基因亚克隆到高效表达质粒pET20b, 得到pET20b-21ScFv.通过IPTG诱导在大肠杆菌E coli BL21(DE3)PlysS中表达了功能分子.表达产物主要以包涵体形式存在,表达量占菌体蛋白的21%.经过包涵体的溶解、Ni-NTA树脂亲和吸附纯化和蛋白质的体外重折叠等一系列的变性和复性过程,获得具有生物活性的高纯度单链抗体片段.ELISA 和Wester n blot证实该融合蛋白保留了与亲本抗体同样的血小板结合特性.SZ-21单链抗体体外能够抑制ADP诱导的血小板聚集,其抑制能力呈剂量依赖性,在浓度为20mg/L时达到最大抑制率.流式细胞仪检测证实该单链抗体能与内皮细胞反应.该单链抗体有望用于血栓性疾病的治疗.