热补针法对类风湿关节炎寒证家兔滑膜炎性反应及miR-155/TLR4/NF-κB信号轴的影响

摘要

目的:观察热补针法对类风湿关节炎(RA)寒证家兔滑膜炎性反应,以及对小核糖核酸-155(miR-155)/Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κB(NF-κB)信号轴的影响,探讨热补针法治疗RA的抑炎机制。方法:将36只家兔随机分为正常组、模型组、激动剂组、抑制剂组、热补针法组(热补组)、激动剂+热补组,每组6只。采用卵蛋白混合弗氏完全佐剂联合低温冷冻法诱导RA寒证家兔模型。激动剂组予腹腔注射miR-155 agomir 4.5 OD;抑制剂组予腹腔注射miR-155 antagomir 6.1 OD;热补组予热补针法针刺双侧“足三里”治疗,留针30 min;激动剂+热补组予腹腔注射miR-155 agomir 4.5 OD,30 min后予热补针法针刺双侧“足三里”治疗,留针30 min。各组干预均1次/d,连续7 d。造模完成后对家兔膝关节行超声检测,测定痛阈和膝关节周径。干预结束后测定家兔痛阈、膝关节周径;采用HE染色法观察家兔膝关节滑膜组织病理形态结构;实时荧光PCR法及Western blot法检测家兔膝关节滑膜组织miR-155、细胞因子信号传导抑制蛋白1(SOCS1)mRNA水平及白细胞介素(IL)-1β、IL-17A、TLR4、NF-κB p65、SOCS1蛋白表达水平。结果:与正常组家兔比较,模型组家兔痛阈显著降低(P<0.05),膝关节周径显著增加(P<0.05),膝关节滑膜组织增生,血流信号丰富,关节腔积液,炎性浸润明显,病理评分显著升高(P<0.05),滑膜组织中miR-155 mRNA水平及IL-1β、IL-17A、TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平显著升高(P<0.05),SOCS1 mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,抑制剂组及热补组家兔痛阈明显升高(P<0.05),膝关节周径显著减小(P<0.05),滑膜组织病理评分降低(P<0.05),滑膜组织中miR-155 mRNA表达水平及IL-1β、IL-17A、TLR4、NF-κB p65表达明显降低(P<0.05),SOCS1 mRNA及蛋白表达显著增高(P<0.05),而激动剂组以上变化则相反(P<0.05);与激动剂组比较,激动剂+热补组痛阈显著升高(P<0.05),膝关节周径显著减小(P<0.05),滑膜组织病理评分降低(P<0.05),滑膜组织中miR-155 mRNA表达水平及IL-1β、IL-17A、TLR4、NF-κB p65蛋白表达水平显著降低(P<0.05),SOCS1 mRNA及蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:热补针法干预RA寒证家兔可提高痛阈,减小膝关节周径,抑制炎性反应,其作用机制与调控miR-155/TLR4/NF-κB信号轴活性相关。