海南坡鹿HSF1cDNA的克隆与表达

摘要

采用RT-PCR和RACE方法扩增海南坡鹿热休克转录调节因子1(Heat shock transcription factor 1,HSF1)cDNA全长,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析;构建pET28a-hdHSF1表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析.结果显示,海南坡鹿HSF1cDNA全长为2 036 bp,含有1个1 578 bp的开放阅读框,编码525个氨基酸.经生物信息学分析,HSF1是一个等电点为4.93的亲水性蛋白.经IPTG诱导表达后,得到一个带组氨酸标签的约62 kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约62 kD特异性抗体结合带,表明海南坡鹿HSF1原核表达载体成功构建并表达.